體外培養(yǎng)的細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時，即使想盡辦法也難以挽回。如何打贏這場細(xì)胞保衛(wèi)戰(zhàn)？最好的方法是從一開始就杜絕污染發(fā)生的可能。      

    注意細(xì)胞房中的這些雷區(qū)，做好抵御細(xì)胞污染的“戰(zhàn)前”部署，將 7 大污染頻發(fā)的實驗“雷區(qū)”各個擊破，讓污染源們無處躲藏！保障實驗的順利進(jìn)行。

    雷區(qū)一  細(xì)胞實驗室入口        

    除了細(xì)胞實驗室專門配置的通風(fēng)系統(tǒng)，入口處就是“無菌凈土”與外面“花花世界”的唯一聯(lián)通之處，這也是我們狙擊污染的第一要塞。     

    身為“無菌凈土”，細(xì)胞實驗室的選址一般都頗有講究，必須設(shè)置在一個僻靜的角落，以免人來人往造成干擾。奢華型細(xì)胞房配有特制的通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)。對于標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞房，黏性門墊則必不可少。 無論誰都能進(jìn)入細(xì)胞房嗎？NO！只有熟記無菌操作要點的人員才能拿到入場券。進(jìn)入細(xì)胞房之前，我們還要向所有與實驗無關(guān)的隨身物品一一告別。經(jīng)過一番折騰后，大門終于為你打開，趕緊換上細(xì)胞房專用的白大褂和拖鞋，然后洗手，消毒，戴上手套，再消毒。記住，一步都不能少?。?！    

    雷區(qū)二  水浴鍋      

    適宜的溫度和生長環(huán)境使水浴鍋成為了細(xì)胞房中各種污染源的最佳“溫床”。水浴鍋一直都是細(xì)胞實驗室污染源聚集的重災(zāi)區(qū)。因此，對其進(jìn)行定期消毒是必須的。除此之外，我們還可以向水浴中加入適量的殺菌劑來抑制各種細(xì)菌、真菌的滋長。     

    水浴時，我們必須確保容器的瓶蓋不與水接觸。因為污染源可能會在此時通過瓶蓋的縫隙順勢留在瓶口，等下一次傾倒液體的時候，整個實驗就遭了殃。水浴結(jié)束后，要記得將蓋子蓋上。可能的話，可以用金屬浴替代水浴。金屬浴的相關(guān)設(shè)備更易清潔，使用也更加省心。用恒溫孵育器代替水浴鍋，確保溫控精確性和均一性的同時也減少了污染的概率。

    雷區(qū)三  顯微鏡     

    通過顯微鏡定期檢查細(xì)胞的匯合程度以及外觀和形態(tài)是“細(xì)胞飼養(yǎng)員”的必修課。但頻繁地與不同細(xì)胞系接觸，使顯微鏡也成了污染的高發(fā)地。     當(dāng)我們在顯微鏡下觀察細(xì)胞或其它培養(yǎng)物時，切忌敞口放置培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶。這樣不僅容易造成溶液飛濺，還有可能在觀察時污染物鏡，并進(jìn)一步造成交叉污染。在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞檢測，一定要快和穩(wěn)。在從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞前就提前做好準(zhǔn)備工作，可以為鏡下作業(yè)節(jié)省更多時間。    

    雷區(qū)四  CO₂培養(yǎng)箱     

    CO₂培養(yǎng)箱不僅是細(xì)胞的搖籃，同時也是污染的蜜罐，防污染工作不容忽視。CO₂培養(yǎng)箱是抵御細(xì)胞污染的一大重鎮(zhèn)，連開關(guān)門的操作都須慎之又慎。培養(yǎng)箱的開關(guān)門除了會立即影響到箱體溫度、濕度和對 pH 的調(diào)節(jié)外，也讓箱外空氣的或環(huán)境中的污染物有機可趁。因此，培養(yǎng)箱的開門時間能短則短，開門次數(shù)越少越好。選擇帶有玻璃內(nèi)分門的培養(yǎng)箱可以降低污染的風(fēng)險，同時也能避免環(huán)境條件在開關(guān)門后有驟然改變。不同于生物安全柜，在日常使用過程中，培養(yǎng)箱不能防止空氣傳播的污染物流入。有些培養(yǎng)箱采用內(nèi)腔 HEPA 濾器去除箱體內(nèi)的微生物，但如果濾器沒有定期更換，它就會搖身一變成為污染的傳染源。除了過濾器，培養(yǎng)箱的承液盤也容易滋生細(xì)菌，建議每周使用無菌用水（如: 無菌蒸餾水）更換，并做好定期消毒工作。此外，承液盤本身也必須清潔消毒。承液盤如果呈綠色，須用過氧化氫來清潔和沖洗。注意！CO₂培養(yǎng)箱是不能直接放在地板上的。帶腳輪的底座除提供靈活的移動便利性，也保持箱體離開地面，當(dāng)實驗人員開關(guān)門時，使地面上的灰塵不易進(jìn)入箱體內(nèi)。     

    許多培養(yǎng)箱箱體內(nèi)有許多隱蔽的角落、焊縫、風(fēng)道和風(fēng)扇，這些地方也是細(xì)菌喜歡藏匿的地方，必須格外注意。最好選擇配置有高溫滅菌的功能的培養(yǎng)箱，可對箱體進(jìn)行自動消毒。一體成型無焊接縫的銅質(zhì)箱體的培養(yǎng)箱也可以有效降低污染風(fēng)險，抑制細(xì)菌的生長。內(nèi)腔一體式和圓角設(shè)計使易培養(yǎng)箱清潔起來更為方便，防止污染形成。

    實驗人員的不規(guī)范操作也會使污染風(fēng)險大增！首先，在操作培養(yǎng)箱時務(wù)必佩戴無菌手套。有可能的話，我們應(yīng)全部使用培養(yǎng)瓶，以防止抓取培養(yǎng)皿時蓋子意外散落，造成溶液飛濺。特別要注意的是，在開放的培養(yǎng)箱前不能交談，以防止唾液飛濺，造成污染。每隔 6–8 周，我們應(yīng)將培養(yǎng)箱完全清空，進(jìn)行清洗：先用肥皂水和清水清潔箱體和部件，再用 70% 酒精或無腐蝕性的消毒劑來擦拭消毒整個腔體，包括隔板、隔板架等部件。     

    雷區(qū)五 生物安全柜     

    生物安全柜是我們進(jìn)行大部分實驗操作的場地，因此，所有無菌操作的“金科玉律”在此都會變得更為重要。通常來說，生物安全柜中的物品排列不應(yīng)太過擁擠，所有與當(dāng)前實驗無關(guān)的東西應(yīng)清出桌面。試劑和儀器盡可能往里放，留出廣闊天地，大干一場，但是，千萬不能堵住排風(fēng)口。在擺放或者實驗過程中，出現(xiàn)液體飛濺的情況，應(yīng)當(dāng)馬上用消毒劑擦拭，以防后患。在開始實驗前，我們必須對超凈臺進(jìn)行全面消毒，簡單的噴霧可解決不了什么問題，正確的做法是對整個機柜表面進(jìn)行擦拭。還有一件事必不可少，那就是事先打開安全柜通風(fēng)系統(tǒng)，流通空氣，直到原有的內(nèi)部濁氣都被排出。

    消毒完畢后，我們就要給實驗用品“分家”了。一般來說，我們可以將超凈臺分為潔凈區(qū)、工作區(qū)和廢棄區(qū)三大板塊，以免手忙腳亂發(fā)生交叉污染?？蓜e一時疏忽，把“臟物”放到潔凈區(qū)哦！如果你是右撇子，不妨試著按上圖“排兵布陣”做好一系列準(zhǔn)備后，開啟實戰(zhàn)模式。作戰(zhàn)區(qū)域不宜選擇敞口容器。無菌容器的使用應(yīng)遵循即用即關(guān)的原則。具體操作時，管好你的手，不能伸到容器內(nèi)部，行動要輕緩，以免動作過大阻礙空氣流通。使用明火同樣會導(dǎo)致氣流紊亂，我們應(yīng)該盡量避免。     

    怎么放置容器的瓶蓋也很有講究。如果超凈臺的桌面干凈，可以將瓶蓋扣在桌面上；反之，則須倒置瓶蓋，當(dāng)然，這時候就需要避免在瓶蓋上方進(jìn)行操作了。選擇能夠側(cè)置的瓶蓋，就不必再為瓶蓋放置問題糾結(jié)了。能夠側(cè)置的瓶蓋，解救你的選擇困難癥。移液時應(yīng)避免吸頭接觸試管或培養(yǎng)瓶內(nèi)部。此外，使用紫外燈時，要注意監(jiān)測運行時間并及時檢修。掌握了以上安全柜守則， 你的細(xì)胞也將更安全。     

    雷區(qū)六  離心機      

    和顯微鏡一樣，離心機也是交叉污染的重災(zāi)區(qū)。平日里我們應(yīng)保持離心機蓋關(guān)閉，拒污染于千里之外。離心機內(nèi)部的小縫隙也是藏污納垢之處，定期清潔轉(zhuǎn)子和腔室至關(guān)重要。    

    雷區(qū)七  窗戶      

    其實，很多細(xì)胞房根本沒有窗戶，即使配有窗戶，也基本上就是擺設(shè)。如果你的細(xì)胞房恰好有一扇窗，那么你必須注意了，因為無論什么時段，窗戶都不允許打開。一旦打開，許多細(xì)菌會乘機夾雜在空氣中溜入細(xì)胞房，后果不堪設(shè)想。陽光的刺激同樣會對室內(nèi)環(huán)境造成影響，有窗戶的實驗室必須緊閉窗門同時拉上窗簾，并做好請勿開啟的警示標(biāo)記。

   無菌操作在于細(xì)節(jié)，更在于態(tài)度，即使現(xiàn)在久經(jīng)沙場的你已經(jīng)對細(xì)胞培養(yǎng)駕輕就熟了，也別因為步驟繁瑣就敷衍了事，掉以輕心。俗話說得好，你今天在無菌操作上省下的時間，都會花在明天細(xì)胞污染重做實驗上。